Também estamos fazendo experimentos de PCR, por que os resultados são sempre muito piores do que outros?

Também estamos fazendo experimentos de PCR, por que os resultados são sempre muito piores do que outros?

No laboratório, olhe para o PCR de outras pessoas, a eficiência da amplificação é alta, a tira de eletroforese perfeita, e olhe para a sua própria, difícil de fazer por muito tempo, sinto que a reação é muito boa, o resultado de um teste falso positivo ... O que é o problema?

Acredito que muitos de nossos parceiros também enfrentaram vários problemas. Quando nos deparamos com uma parede em experimentos de PCR, subconscientemente analisamos os fatores dentro do sistema de reação, mas frequentemente ignoramos a importante influência dos consumíveis nos experimentos.

O resultado da PCR está errado, os consumíveis da PCR podem ser a razão essencial. Por um lado, a micro-contaminação de consumíveis ou a introdução de inibidores causará poluição experimental; Por outro lado, a seleção inadequada de consumíveis também prejudicará os resultados experimentais.

O problema volta. Existem muitos tipos de consumíveis de PCR, então como escolher os corretos para tornar o experimento mais suave? Quais são os problemas aos quais devemos prestar atenção? Não se preocupe hojeI combinado com muitos anos de experiência, resolvendo os problemas comuns de seleção de consumíveis de PCR, espero ajudá-lo.

 

Q1: Por que os consumíveis de PCR geralmente são feitos de material PP?

Huida: Como os suprimentos de PCR geralmente estão em contato direto com reagentes ou amostras, os materiais de polipropileno (PP) são biologicamente inertes, não aderem a biomoleculares e têm boa tolerância química e tolerância à temperatura (pode ser autoclave a 121 ° C, também pode suportar mudanças de temperatura durante o ciclo térmico).

 

P2: Como devo escolher entre os diferentes tamanhos de tubos / placas de PCR?

HUIDA: Objetivo da seleção: selecionar os produtos certos de acordo com os requisitos experimentais específicos. A maior parte do tamanho do tubo de PCR pode atender aos requisitos da reação de PCR. Com base nisso, é recomendável escolher primeiro o tubo de baixo volume. Como o tubo / placa de reação de baixo volume tem um pequeno espaço no alto, a condutividade do calor é melhorada e a evaporação é reduzida. Ao mesmo tempo, é necessário evitar adicionar muitas ou poucas amostras. Muito pode levar à diminuição da condutividade térmica, derramamento e contaminação cruzada, enquanto muito pouco pode resultar em perda por evaporação da amostra.

Especificações e volumes de tubos de reação comuns:

Tubo único / combinado: 0,5ml, 0,2ml, 0,15ml

Placa de 96 poços: 0,2ml, 0,15ml

Placa de 384 poços: 0,04ml

 

Q3: quando a quantidade da amostra é pequena, eu escolherei tubo único ou tubo combinado, mas por que alguns têm tampa plana e alguns têm tampa convexa?

Huida: Quando a quantidade da amostra é pequena, o tubo único ou o tubo combinado serão preferidos. Porém, quando o volume de reação é grande, o tubo único é dominante, e o volume pode chegar a 0,5 mL. E a tampa plana e a tampa convexa, cada uma tem a vantagem, específicas podem se referir às seguintes informações.

Tubo único: 0,2ml e 0,5ml; Pode escolher a quantidade da amostra de forma flexível.

Tubo de conexão: 0,2ml ou 0,15ml é opcional; 8 ou 12 tubos são comuns.

Tampa plana: pode fornecer transmissão precisa do sinal de fluorescência para qPCR; Fácil de escrever marcas.

Tampa convexa: contato com a tampa quente do instrumento de PCR para reduzir a deformação do tubo de reação causada pela pressão; No entanto, ele afetará a transmissão do sinal de fluorescência e não pode ser aplicado ao experimento qPCR.

 

Q4: Por que algumas placas de PCR têm saias e outras não?

Huida: Na verdade, a saia da placa de PCR é projetada para se adaptar melhor às aplicações de automação, fornecendo suporte estável e resistência mecânica para o instrumento, bem como maior estabilidade durante o processo de pipetagem.

As placas de PCR são geralmente divididas em sem hemline, meia hemline e full-hemline.

Sem Placa: Adequado para a maioria das máquinas PCR ou máquinas qPCR, mas não para aplicações de automação. A estabilidade não é alta no processo de pipetagem, por isso precisa ser usado com suporte de placa.

Placa de borda de meia saia: pode ser adaptada para aplicação de etiqueta ou código de barras, e aplicação automática, e tem boa estabilidade de pipetagem.

Placa de borda de saia completa: muito adequada para aplicações experimentais automatizadas, também pode ser adaptada para etiqueta e aplicação de código de barras. Possui boa resistência mecânica, pode ser utilizado em instrumento PCR modulo bojo, e possui alta estabilidade no processo de pipetagem.

 

Q5 :Para placas de PCR, por que os cantos e rótulos não são exatamente os mesmos?

Huida: Depende do efeito do corte do canto e da marcação.

Corte de canto: A escolha da posição de corte de canto da placa PCR depende dos requisitos do instrumento adequado para fácil posicionamento.

Identificação: marcadores alfanuméricos em placas de PCR ajudam a identificar poços individuais e locais de amostra. Geralmente para o logotipo digital colorido em relevo ou logotipo gravado. Para algumas aplicações automatizadas, as placas de reação impressas e marcadas são mais bem vedadas.

 

Q6: Por que algumas placas PCR são convexas enquanto outras são planas? Qual é melhor?

Huida: O que se encaixa melhor. Existem dois tipos de placas PCR comuns: margem de poro plana e margem de poro alta.

Placa de reação com margem de orifício plano, adequada para a maioria dos aparelhos de PCR.

As placas de reação com bordas de orifício crescentes facilitam a vedação da membrana e reduzem o risco de contaminação cruzada entre as amostras.

 

Huida tem muitos anos de experiência na produção e processamento de produtos de PCR e nos altos padrões da indústria. A linha de produtos é rica e pode atender à grande maioria das aplicações experimentais de PCR. Venha e escolha os produtos certos para suas aplicações experimentais.

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Horário da postagem: Jun-03-2021